EVO视讯的细胞培养步骤如下，确保在相应条件下进行，以促进细胞的健康生长和繁殖。

培养条件

使用1640培养基，添加10%的胎牛血清(FBS)和1%的青链霉素(PS)，在37℃、5% CO₂环境中进行细胞的贴壁或悬浮培养。

传代方法

首次传代的建议比例为1:2，确保在细胞达到80%的汇合度时进行传代。

传代情况

每两天更换细胞培养液，以维持细胞良好的生存状态。

细胞处理

收到EVO视讯细胞后，请先用75%的酒精喷洒消毒细胞瓶，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入培养箱中，静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行观察和拍照。前三天的显微镜图像是重要的售后依据，若未提供照片，则默认细胞状态良好。

细胞传代步骤

对于贴壁细胞，步骤如下:

1. 弃去培养液，使用不含钙镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变化，达到适当状态后加入完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以使其脱落，转移至15ml离心管中，离心后再重悬于完全培养基中。
4. 将细胞按1:2的比例分瓶传代，并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中。

悬浮细胞传代步骤

悬浮细胞的处理方法如下:

1. 采用半换液法，竖着培养瓶静置1小时，轻吸掉部分培养基后补充新的完全培养基。
2. 若细胞需要分瓶，可以将细胞悬液在离心管中处理，离心后重悬并按1:2比例进行分瓶传代。

细胞冻存

当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗，然后添加胰蛋白酶消化，观察后终止反应。将细胞重悬于无血清冻存液中并分装入冻存管。

冻存细胞应直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐，需提前在-80℃存放24小时以上。

细胞复苏

从液氮中取出冻存管后，迅速将其置于37℃水浴解冻，并消毒后转移至含5ml完全培养基的离心管中。随后进行离心，重悬后接种至T25培养瓶，放入培养箱中继续培养。

注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会出现脱落现象，属于正常情况。若脱落较多，可通过离心处理后进行细胞重悬以确保细胞的健康。

在使用EVO视讯的细胞培养和冻存技术时，请务必遵循上述步骤，以获得最佳的实验结果。确保您在整个过程中保持无菌操作，以促进细胞的顺利生长和繁殖。