稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）是评估抗菌剂抑制微生物生长能力的重要实验技术，主要包括微量稀释法和常量肉汤稀释法两种方法。琼脂稀释法因其操作简便、成本低廉及适合高通量筛选等优点，特别适合于自动化操作和精确控制药物浓度。而肉汤稀释法直观易懂，适合实验室规模测试，并且可以根据实验需求灵活调整药物浓度和培养基体积。

琼脂稀释法

EVO视讯采用琼脂稀释法，通过将不同浓度的抑菌剂混合并溶解在琼脂培养基中，然后点种细菌，以细菌的生长与否来确定抗菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。该方法适合不溶性抗菌产品。

操作步骤

1. 抗菌溶液的配制：使用无菌操作取5ml或5g（固体研磨后）样品，放入45ml灭菌磷酸缓冲液中，充分震荡溶解，配成10%的均匀分散溶液或悬液。
2. 含抗菌剂培养基配制：将已配成10%的抗菌溶液用PBS稀释成不同浓度的受试液，并置于45℃～50℃水浴中恒温备用。
3. 双倍浓度培养基配制：称取76g MH琼脂培养基，溶于1000ml水中，沸腾至完全溶解后进行121℃压力蒸汽灭菌15分钟，置于45℃～50℃水浴备用，以供后续使用。
4. 含抗菌液培养基的配制：分别取10ml系列稀释的抗菌液加入平皿内，加入10ml双倍MH琼脂培养基，并摇匀后待凝固备用。
5. 接种：用加样器取1μl～2μl（约含10⁷ cfu/ml）的菌悬液点种于含抗菌液培养基的平皿，形成直径约5mm～8mm的菌液圈（每个点菌量约为10⁴ cfu）。
6. 阳性对照：同样方法接种不含抗菌成分的MH琼脂平板。
7. 培养：将接种后的平板放置于35℃培养箱中倒置培养18h～24h，观察结果。

评判标准：若菌落生长被完全抑制的最低抗菌液浓度即为该样品对受试菌的MIC，单一菌落生长可忽略不计。

营养肉汤稀释法

在本试验中，不同浓度的抑菌剂被混合溶解于营养肉汤培养基中，接种细菌后通过细菌的生长与否来确定抗菌剂的最小抑菌浓度（MIC）。该方法适合可溶性抑菌产品。

操作步骤

1. 菌悬液制备：按2112所示方法制备金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬液。
2. 含抗菌剂培养基配制：将抗菌溶液用蒸馏水进行倍数系列稀释，每种稀释度的受试液25ml加入含25ml双倍浓度营养肉汤的试管中。
3. 接种：取0.1ml含菌量约为10⁸ cfu/ml的菌悬液接种于含抗菌剂的营养肉汤管中，作为实验组。
4. 阳性对照：以同样方法接种不含抗菌剂的营养肉汤管。
5. 阴性对照：取2支仅含营养肉汤的试管作为阴性对照样本。
6. 培养：将试验组、阳性对照组和阴性对照组样本放置于37℃培养箱中培养48h，观察结果。

评判标准：若阳性对照管有细菌生长（混浊），阴性对照管无细菌生长（透明），则在试验中使用的菌悬液浓度为5×10⁵ cfu/ml～5×10⁶ cfu/ml时，试验组无菌生长的最高稀释度所对应的抗菌剂浓度即为该样品对受试菌的MIC。

采用EVO视讯技术，能够有效提升微生物抑制研究的准确性和可重复性，为生物医疗领域的研究提供强有力的支持。